WB實(shí)驗(yàn)一圖搞定全步驟~
你是不是也對著Western Blot實(shí)驗(yàn)步驟一頭霧水？別慌！這張流程圖幫你理清從“蛋白提取”到“條帶曝光”的全過程??
?? 第一步：提取蛋白 選擇合適的裂解液去裂解細(xì)胞/組織 → 低溫+抑制劑保護(hù)
?? 第二步：蛋白定量 BCA法或其他蛋白定量法檢測蛋白濃度 → 充分變性
?? 第三步：電泳分離 上樣 → 跑膠（根據(jù)分子量大小分離）
?? 注意膠濃度、電壓、避免產(chǎn)熱過多
?? 第四步：轉(zhuǎn)膜 蛋白條帶轉(zhuǎn)印到PVDF/NC膜
?? 小貼士：膜要活化、無氣泡、冰浴降溫，轉(zhuǎn)完用麗春紅檢查效率
?? 第五步：封閉 + 抗體孵育 封閉非特異位點(diǎn) → 一抗（4°C 過夜）→ 二抗（室溫1-2h）
?? 封閉液選牛奶或BSA，使用一抗和二抗前都要先洗洗洗！
?? 第六步：曝光檢測 加化學(xué)發(fā)光底物（ECL）→ 二抗上的酶激發(fā)熒光 → 曝光或成像儀采集條帶
?? ECL現(xiàn)配現(xiàn)用，控制曝光時(shí)間，保持膜濕潤
? 出現(xiàn)非特異條帶？優(yōu)化抗體濃度或封閉條件吧～
保存這張圖，實(shí)驗(yàn)再也不迷路??
@你身邊正在苦戰(zhàn)WB的小伙伴，一起變高手??
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